3.冻存液:90%培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

2)细胞处理:

复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml 培养基,培养过夜)。隔天换液并检查细胞密度。

细胞冻存:

待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法步骤进行,重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每Iml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

细胞接受后的处理:

5.接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

培养方法:

如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,留10ml培养液继续培养。如果细胞已长满(达80-90%)。即可进行传代,具体步骤如下:

a,弃去培养液,用PBS洗1-2次。

C,加入等量的的培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新的培养 

d,传代比例:1.2-1:3

方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞起,将细胞悬液按12到1.3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

操作要点:

6)隔天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80-90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2-3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

友情提示注意以下几点:

3、如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室

细胞用途:仅供科研使用。